近日，國(guó)家器審中心消息，根據(jù)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2019年度醫(yī)療器械注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則項(xiàng)目計(jì)劃的有關(guān)要求，我中心組織編制了《一次性使用醫(yī)用沖洗器產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)指導(dǎo)原則》等27個(gè)二類(lèi)指導(dǎo)原則（附件1），現(xiàn)已形成征求意見(jiàn)稿。

具體文件名稱(chēng)，如下圖：

部分內(nèi)容如下：

01

家用體外診斷器械（IVD）標(biāo)識(shí)和注冊(cè)申報(bào)有關(guān)要求技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則適用于第二類(lèi)、第三類(lèi)家用體外診斷醫(yī)療器械上市前風(fēng)險(xiǎn)考慮、性能研究、臨床驗(yàn)證以及說(shuō)明書(shū)和標(biāo)簽撰寫(xiě)，明確該類(lèi)產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料要求。第一類(lèi)家用醫(yī)療器械應(yīng)參考本指導(dǎo)原則對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行安全有效評(píng)價(jià)。家用體外診斷醫(yī)療器械制造商應(yīng)優(yōu)先考慮產(chǎn)品指導(dǎo)原則的要求，產(chǎn)品指導(dǎo)原則與本指導(dǎo)原則內(nèi)容沖突時(shí)，以產(chǎn)品指導(dǎo)原則為準(zhǔn)。

傳統(tǒng)上，體外診斷醫(yī)療器械主要由醫(yī)院、臨床實(shí)驗(yàn)室和醫(yī)生辦公室使用。然而，近年來(lái)，人們對(duì)家用IVD的關(guān)注日益增長(zhǎng)，這種家用IVD并沒(méi)有醫(yī)生來(lái)解釋測(cè)試結(jié)果。由于關(guān)注日益增長(zhǎng)，越來(lái)越多與這些器械有關(guān)的上市前產(chǎn)品正在或者準(zhǔn)備提交注冊(cè)。因此，需要制定統(tǒng)一的家用IVD評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)，更好確保以一致方式對(duì)這些器械進(jìn)行監(jiān)管，并為消費(fèi)者提供可靠、有用和充分標(biāo)記的產(chǎn)品。本指導(dǎo)原則即給出的是關(guān)于確定家用IVD的安全性和有效性使用方面須考慮的關(guān)鍵事項(xiàng)的意見(jiàn)。這些意見(jiàn)供家用IVD制造商參考和使用。

02

泌乳素檢測(cè)試劑（盒）注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

泌乳素檢測(cè)試劑（盒）用于體外定量測(cè)定人血清或血漿樣本中泌乳素（Prolactin，PRL）的濃度。本指導(dǎo)原則適用于以抗原-抗體反應(yīng)為基本原理對(duì)泌乳素進(jìn)行定量檢測(cè)的體外診斷試劑，如化學(xué)發(fā)光法、酶免疫法或熒光免疫法等，不適用于用膠體金或其他方法標(biāo)記的半定量測(cè)定泌乳素試劑（如試紙條等）。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

03

血清淀粉樣蛋白A測(cè)定試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

血清淀粉樣蛋白A測(cè)定試劑是指用于體外定量測(cè)定人全血、血清或血漿中血清淀粉樣蛋白A （serum amyloid A protein， SAA）含量的試劑。

本指導(dǎo)原則適用于以膠乳免疫比濁法為基本原理對(duì)血清淀粉樣蛋白A進(jìn)行定量檢測(cè)的體外診斷試劑。本法采用的原理是包被有血清淀粉樣蛋白A（SAA）抗體的膠乳顆粒，當(dāng)與含有SAA抗原的樣品混合時(shí)，會(huì)發(fā)生凝集反應(yīng)，從而引起吸光度或光強(qiáng)度的變化，其大小與樣品中SAA抗原含量成比例。將吸光度或光強(qiáng)度變化與已知濃度的校準(zhǔn)品比較，可以定量得出樣品中血清淀粉樣蛋白A的含量。

基于膠乳免疫比濁法原理的診斷試劑由于適用儀器的不同分為透射免疫比濁法和散射免疫比濁法：

1、透射免疫比濁法：一定波長(zhǎng)的光束通過(guò)反應(yīng)溶液時(shí)，可被抗原抗體復(fù)合物吸收，從而使透射光減少，用吸光度表示，復(fù)合物的濃度與吸光度呈正比。

2、散射免疫比濁法：一定波長(zhǎng)的光束通過(guò)反應(yīng)溶液時(shí)，由于抗原抗體復(fù)合物的形成而被散射，復(fù)合物的形成速率或終濃度與散射光強(qiáng)度呈正比。

04

類(lèi)風(fēng)濕因子檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

類(lèi)風(fēng)濕因子測(cè)定試劑用于體外定量測(cè)定人血清或血漿樣本中類(lèi)風(fēng)濕因子（Rheumatoid Factor，RF）的濃度。本指導(dǎo)原則適用于以免疫透射比濁法為基本原理，利用半自動(dòng)、全自動(dòng)生化分析儀或其他類(lèi)型的分析儀，在醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室對(duì)人體血清或血漿樣本中類(lèi)風(fēng)濕因子含量進(jìn)行體外定量分析的試劑。

05

總?cè)饧谞钕僭彼岫繖z測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見(jiàn)稿）

總?cè)饧谞钕僭彼釞z測(cè)試劑是指利用抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)方法對(duì)人血清、血漿中的總?cè)饧谞钕僭彼幔═otal Triiodothyronine，TT3）進(jìn)行體外定量檢測(cè)的試劑。

本指導(dǎo)原則適用于以酶標(biāo)記、（電）化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、（時(shí)間分辨）熒光標(biāo)記等標(biāo)記方法標(biāo)記，以微孔板、管、磁顆粒、微珠和塑料珠等為載體，采用競(jìng)爭(zhēng)法定量檢測(cè)人TT3的免疫分析試劑，不適用于以膠體金標(biāo)記的TT3試紙條、用125I等放射性同位素標(biāo)記的各類(lèi)TT3放射免疫或免疫放射檢測(cè)試劑。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

06

25-羥基維生素D測(cè)定試劑（標(biāo)記免疫分析法）注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（征求意見(jiàn)稿）

25-羥基維生素D檢測(cè)試劑用于體外定量測(cè)定人血清或血漿樣本中總25-羥基維生素D（25-hydroxyvitamin D，25-OH-VD）的濃度。

本指導(dǎo)原則適用于以酶標(biāo)記、（電）化學(xué)發(fā)光標(biāo)記等標(biāo)記方法為捕獲抗體，以微孔板、管、磁顆粒、微珠和塑料珠等載體為包被抗體，用于體外定量檢測(cè)人血清或血漿中總25-羥基維生素D含量的免疫分析試劑盒。

本指導(dǎo)原則不適用于：

（a）用膠體金或其他方法標(biāo)記的定性或半定量測(cè)定人總25-羥基維生素D的試劑（如試紙條、生物芯片等）；

（b）擬用于單獨(dú)銷(xiāo)售的總25-羥基維生素D校準(zhǔn)品和總25-羥基維生素D質(zhì)控品；

（c）色譜法原理的總25-羥基維生素D檢測(cè)試劑。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

07

特定蛋白免疫分析儀注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（征求意見(jiàn)稿）

本指導(dǎo)原則適用于基于散射光比濁法或透射比濁法，與適配試劑配合使用，用于人體樣本中待測(cè)物的定性和/或定量分析的特定蛋白免疫分析儀。對(duì)基于其他反應(yīng)原理的產(chǎn)品，可參照本指導(dǎo)原則相關(guān)適用條款準(zhǔn)備注冊(cè)申報(bào)資料。

08

地中海貧血基因突變檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

地中海貧血（簡(jiǎn)稱(chēng)地貧）是一種常染色體隱性遺傳病，是由于珠蛋白基因發(fā)生突變（點(diǎn)突變或缺失等），致使珠蛋白肽鏈合成減少或完全不能合成而導(dǎo)致的一組單基因遺傳性溶血性疾病，輕者可無(wú)臨床表現(xiàn)，重者以進(jìn)行性溶血性貧血為主要特征。根據(jù)珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類(lèi)型，地貧分為α，β和γ地貧等，臨床上最常見(jiàn)的是α和β地貧。地貧主要分布在地中海沿岸、東南亞和少數(shù)非洲地區(qū)，具有明顯的種族特性和地域分布差異。地貧是我國(guó)南方地區(qū)最常見(jiàn)、危害最大的遺傳病之一，尤以廣西、云南、廣東、海南、四川和貴州等省份為甚，云南、海南和廣東的地貧人群攜帶率可達(dá)10%以上，廣西更是達(dá)到了20%以上。

α地貧主要是由于α-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起。α珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括2個(gè)胎兒期和成人期表達(dá)基因（α2和α1），基因的排列順序?yàn)?’-α2-α1-3’。根據(jù)單倍型的情況，可將α地貧分為3類(lèi)：（1）缺失型α+地貧（-α/），缺失1個(gè)α基因；（2）缺失型α0地貧（--/），2個(gè)α基因同時(shí)缺失；（3）非缺失型α+地貧（αTα/或ααT/ ），1個(gè)α1或α2基因發(fā)生點(diǎn)突變或少數(shù)幾個(gè)堿基的缺失。中國(guó)現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少19種α珠蛋白基因大片段缺失和38種α珠蛋白基因點(diǎn)突變。其中，6 種α珠蛋白基因突變：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377 T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群總數(shù)的98%。

α地貧基因型和臨床分型的關(guān)系已經(jīng)基本闡明。α地貧的表型嚴(yán)重程度隨著功能性α珠蛋白基因的減少而加重：（1）1個(gè)α基因缺失或點(diǎn)突變（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），稱(chēng)為靜止型α地貧，通常不貧血，血液學(xué)表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素；（2）2個(gè)α基因缺失或復(fù)合α基因點(diǎn)突變，或點(diǎn)突變，其基因型為--/αα或-α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/αTα，稱(chēng)為輕型α地貧，臨床表現(xiàn)α地貧特征，血液學(xué)檢查有小細(xì)胞低色素特征；（3）3個(gè)α基因缺失或復(fù)合α基因點(diǎn)突變，基因型為--/-α或--/αTα，稱(chēng)為中間型α地貧，又稱(chēng)Hb H病，患者有中重度貧血。某些基因型為αTα/αTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/αQSα和αCSα/αQSα）也表現(xiàn)為Hb H病。通常，--/αTα的非缺失型 Hb H病較單純?nèi)笔虷b H?。?-/-α）的臨床表現(xiàn)更為嚴(yán)重，特別是基因型為--/αCSα或--/αQSα的Hb H病患者，貧血程度較為嚴(yán)重；（4）4個(gè)基因缺失，其基因型為--/--，稱(chēng)為重型α地貧，又稱(chēng)Hb Bart’s胎兒水腫綜合征，此類(lèi)個(gè)體一般無(wú)法存活到出生或分娩后半小時(shí)內(nèi)死亡。

β地貧是由于β珠蛋白基因發(fā)生點(diǎn)突變或缺失而引起，以點(diǎn)突變?yōu)橹?，少?shù)為缺失型。β珠蛋白基因簇位于11p15.3，包括2個(gè)成人期表達(dá)基因（β和δ），基因的排列順序?yàn)?’-δ-β-3’。根據(jù)β珠蛋白鏈合成量的程度，可將β地貧分為3類(lèi)：（1）β0地貧，β珠蛋白鏈完全不能合成，其所在的等位基因稱(chēng)為β0地貧等位基因；（2）β+地貧，β珠蛋白鏈合成減少，其所在的等位基因稱(chēng)為β+地貧等位基因；（3）β++地貧，又稱(chēng)沉默型β地貧，β珠蛋白鏈合成輕微減少。中國(guó)已報(bào)道84中β珠蛋白基因點(diǎn)突變和11種β珠蛋白基因缺失。其中，6種點(diǎn)突變：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB： c.79G>A，HBB： c.316-197C>T和HBB： c.216_217insA占了全部突變類(lèi)型的90%以上。

β地貧的臨床表型可分為4種：（1）靜止型β地貧，基因型為β++/βN，血液學(xué)表型正?；蚺R界，一般只能通過(guò)分子診斷識(shí)別；（2）輕型β地貧，基因型為β0/βN或β+/βN，臨床表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素和HB A2值升高；（3）中間型β地貧，基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異范圍大，可從輕度貧血到中度貧血，多于幼兒期出現(xiàn)中度貧血；（4）重型β地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，通常伴有嚴(yán)重貧血，需要定期輸血才能存活?；純撼錾鷷r(shí)無(wú)癥狀，常于嬰兒期（3-12月齡）發(fā)病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎(chǔ)較為復(fù)雜，顯性β地貧突變的雜合子（βD/βN），合并α地貧突變的β地貧突變純合子（β0/β0），或合并α珠蛋白三聯(lián)體的β地貧突變雜合子（β0/βN或β+/βN），也會(huì)顯示中間型的表型。

2018年發(fā)布的《重型β地中海貧血的診斷和治療指南》明確規(guī)定：對(duì)于重型β地中海貧血的診斷，有條件者均應(yīng)進(jìn)行基因診斷，基因型為純合子或復(fù)合雜合子為確診本病的指標(biāo)。2018年發(fā)布的《兒童非輸血依賴(lài)型地中海貧血的診治和管理專(zhuān)家共識(shí)》也明確規(guī)定：地貧基因檢測(cè)為非輸血依賴(lài)型地貧的診斷依據(jù)之一。

另外，國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委發(fā)布的相關(guān)文件要求：為減少重型地貧患兒出生，在我國(guó)地貧高發(fā)省份實(shí)施地貧防控試點(diǎn)項(xiàng)目。主要流程包括：（1）對(duì)新婚夫婦和計(jì)劃懷孕夫婦在懷孕前或孕期進(jìn)行血常規(guī)常規(guī)初篩；（2）對(duì)夫婦一方或雙方血常規(guī)檢查結(jié)果陽(yáng)性的夫婦進(jìn)行血紅蛋白分析復(fù)篩；（3）對(duì)血紅蛋白分析復(fù)篩結(jié)果均為陽(yáng)性的夫婦，取其抗凝靜脈全血進(jìn)行相應(yīng)的α+β地貧基因檢測(cè)；（4）綜合夫婦雙方病史詢(xún)問(wèn)、地貧篩查和基因檢測(cè)結(jié)果，判定為高風(fēng)險(xiǎn)夫婦。對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)夫婦進(jìn)行追蹤，及時(shí)了解受檢婦女懷孕情況，指導(dǎo)女方在懷孕后適宜時(shí)期接受產(chǎn)前診斷。產(chǎn)前診斷的對(duì)象為胎兒，樣本類(lèi)型為胎兒的絨毛、羊水和臍帶血，檢測(cè)項(xiàng)目為相應(yīng)的β地貧基因檢測(cè)。

綜上，結(jié)合該類(lèi)產(chǎn)品臨床使用的實(shí)際情況，本指導(dǎo)原則的預(yù)期用途可為：用于體外定性檢測(cè)人外周靜脈全血或胎兒羊水等樣本中基因組DNA的α和/或β地貧基因突變或缺失，用于：α和/或β地貧的遺傳診斷，或地貧高風(fēng)險(xiǎn)夫婦的評(píng)估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷。

結(jié)合該類(lèi)產(chǎn)品在中國(guó)注冊(cè)的實(shí)際情況以及當(dāng)前的認(rèn)知，本指導(dǎo)原則僅對(duì)“α和/或β地貧的遺傳診斷”預(yù)期用途的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了詳細(xì)闡述。針對(duì)其他兩個(gè)預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對(duì)部分內(nèi)容進(jìn)行了闡述，申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，對(duì)本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容進(jìn)行補(bǔ)充評(píng)價(jià)。

本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于PCR探針?lè)ǚ椒ń⒌?，?duì)于其他分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)（如：PCR-反向點(diǎn)雜交法和gap-PCR法等），可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊(cè)申報(bào)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。

09

乙型肝炎病毒e抗原、e抗體檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）屬嗜肝DNA 病毒科， 是乙型病毒性肝炎的病原體。HBV 主要經(jīng)血（如不安全注射等）、母嬰及性接觸傳播。HBV 感染呈世界性流行，但不同地區(qū)HBV感染的流行強(qiáng)度差異很大。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約20億人曾感染HBV，其中2.4 億人為慢性HBV感染者，每年約有65萬(wàn)人死于HBV感染所致的肝功能衰竭、肝硬化和肝細(xì)胞癌（HCC）。

通過(guò)免疫學(xué)方法檢測(cè)HBV標(biāo)志物是臨床最常用的HBV感染的病原學(xué)診斷方法。HBV具有三個(gè)抗原系統(tǒng)，如：HBsAg與抗-HBs、HBeAg與抗-HBe、抗-HBc及其抗-HBc-IgM檢測(cè)等。HBV抗原與抗體的血清學(xué)標(biāo)志物與臨床關(guān)系復(fù)雜，必須對(duì)幾項(xiàng)標(biāo)志物綜合分析，方有助于臨床診療。

乙型肝炎病毒e抗原是從病毒C基因的第一個(gè)起始密碼子開(kāi)始翻譯產(chǎn)生的包含Pre C及C序列的蛋白，該蛋白經(jīng)細(xì)胞內(nèi)蛋白酶切除其N(xiāo)端19個(gè)氨基酸及C端34個(gè)氨基酸后成為可分泌的e抗原。HBeAg為可溶性蛋白質(zhì)，產(chǎn)生后分泌入血。它是在癥狀出現(xiàn)后大約1周出現(xiàn)，通常在幾周后消失，但HBV慢性感染者可能持續(xù)存在。血清HBeAg與HBV復(fù)制及疾病傳染性相關(guān)，在HBsAg陽(yáng)性人群中，HBeAg的消失以及抗-HBe的出現(xiàn)是血清學(xué)轉(zhuǎn)換的標(biāo)志，這與HBV復(fù)制和傳染性相對(duì)減弱相關(guān)。e抗原的血清學(xué)轉(zhuǎn)換在臨床治療、預(yù)后判斷過(guò)程中具有重要的意義。

近年來(lái)發(fā)現(xiàn)在一部分感染者中，HBV發(fā)生了在Pre C區(qū)的基因突變，導(dǎo)致HBeAg不能合成或合成量降低，從而出現(xiàn)了患者血清HBeAg檢測(cè)結(jié)果為陰性，但HBV DNA仍在顯著復(fù)制的情況。

本指導(dǎo)原則適用于利用酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨免疫熒光法等免疫學(xué)方法，對(duì)來(lái)源于血清或血漿等人體樣本中的HBeAg、抗-HBe進(jìn)行體外檢測(cè)，其臨床預(yù)期用途如下：

（1）HBeAg適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的的輔助診斷；慢性乙型肝炎病毒患者HBeAg陽(yáng)性與陰性人群區(qū)分；慢性乙型肝炎患者HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定；慢性乙肝病毒攜帶孕婦及產(chǎn)褥期產(chǎn)婦的檢測(cè)。該指標(biāo)定量檢測(cè)可用于抗病毒療效的監(jiān)測(cè)等。

（2）抗-HBe適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的的輔助診斷及慢性乙型肝炎患者HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。目前相關(guān)文獻(xiàn)尚未闡明該標(biāo)志物定量檢測(cè)的臨床意義。

本指南適用于檢測(cè)HBeAg、抗-HBe的定性檢測(cè)試劑，關(guān)于HBeAg的定量檢測(cè)可參考本指南。

10

乙型肝炎病毒耐藥相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑技術(shù)審查指導(dǎo)原則

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染呈世界性流行，但不同地區(qū)HBV 感染的流行強(qiáng)度差異很大。全國(guó)2006年乙型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查表明，我國(guó)1～59歲一般人群乙型肝炎表面抗原（Hepatitis B surface antigen，HBsAg）陽(yáng)性率為7.18%，2014年中國(guó)疾病預(yù)防控制中心開(kāi)展的全國(guó)1～29歲人群乙型肝炎血清流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，1～4歲，5～14歲，15～29歲人群HBsAg陽(yáng)性率分別為0.32%，0.94%和4.38%，我國(guó)現(xiàn)有HBV感染者約有8000萬(wàn)。在臨床治療慢性乙型肝炎病毒感染的方案中，使用抗病毒藥物是最主要的手段?？笻BV藥物主要包括干擾素α和核苷（酸）類(lèi)似物兩大類(lèi)，其中核苷（酸）類(lèi)藥物服用便捷，抗病毒效力強(qiáng)，不良反應(yīng)較小，但核苷（酸）類(lèi)藥物在抗HBV治療中需要長(zhǎng)期服藥，一旦出現(xiàn)病毒耐藥，可能導(dǎo)致治療失敗、病毒DNA反彈、肝功能惡化甚至肝衰竭。因此，如何發(fā)現(xiàn)病毒耐藥基因突變，進(jìn)而合理調(diào)整治療方案，在慢性乙型肝炎臨床治療中具有極其重要的意義。

HBV屬于嗜肝DNA病毒科（hepadnaviridae），HBV基因組含有4個(gè)部分重疊的開(kāi)放讀框（ORF），即前-S/S區(qū)、前-C/C 區(qū)、P區(qū)和X區(qū)。其中P區(qū)編碼聚合酶/逆轉(zhuǎn)錄酶，目前已知的核苷（酸）類(lèi)藥物的耐藥突變均發(fā)生在HBV的P區(qū)。HBV雖然屬于DNA病毒，但其復(fù)制需經(jīng)過(guò)以前基因組RNA為復(fù)制中間體的逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程。在此過(guò)程中，HBV逆轉(zhuǎn)錄酶由于缺乏嚴(yán)格的校正機(jī)制，導(dǎo)致HBV復(fù)制過(guò)程中核苷酸錯(cuò)配率較高。HBV復(fù)制的這種過(guò)程和特點(diǎn)，導(dǎo)致同一患者體內(nèi)不同的HBV株基因序列之間也存在差異，因此，每一個(gè)患者體內(nèi)的病毒都是由不同基因序列的病毒株組成的動(dòng)態(tài)變化的病毒準(zhǔn)種，不同基因序列的病毒株在病毒準(zhǔn)種中所占的相對(duì)比例，一方面取決于病毒株自身的復(fù)制能力，另一方面也受到機(jī)體免疫系統(tǒng)或藥物的選擇壓力的影響。

抗病毒藥物核苷（酸）類(lèi)似物進(jìn)入機(jī)體后，形成三磷酸活性成分，與機(jī)體天然的脫氧三磷酸核苷（dNTP）競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合到HBV聚合酶上，使HBV的DNA鏈合成終止。如果患者體內(nèi)的HBV P區(qū)序列發(fā)生突變，導(dǎo)致產(chǎn)生的HBV聚合酶與核苷（酸）類(lèi)似物結(jié)合力降低，突變的HBV即不受核苷（酸）類(lèi)似物的抑制或抑制能力下降，在繼續(xù)應(yīng)用核苷類(lèi)似物治療的情況下，突變株病毒由于對(duì)核苷（酸）類(lèi)似物不敏感而逐漸成為優(yōu)勢(shì)株，從而導(dǎo)致患者對(duì)于核苷（酸）類(lèi)似物的耐藥。

乙型肝炎病毒的耐藥突變分為原發(fā)性耐藥突變和補(bǔ)償性耐藥突變，原發(fā)性耐藥突變指藥物作用靶位的基因及其編碼的氨基酸發(fā)生突變，導(dǎo)致突變病毒株對(duì)治療藥物的敏感性下降。雖然原發(fā)性耐藥突變株對(duì)藥物的抵抗性增加，但也常導(dǎo)致突變病毒本身的復(fù)制能力下降。補(bǔ)償性耐藥突變指由于原發(fā)性耐藥突變病毒株復(fù)制能力下降，在原發(fā)性耐藥突變的基礎(chǔ)上，病毒株在其他位點(diǎn)發(fā)生突變，這些突變可部分恢復(fù)突變病毒的復(fù)制能力或可導(dǎo)致突變病毒對(duì)藥物敏感性的進(jìn)一步下降。

目前經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)用于抗HBV治療的核苷（酸）類(lèi)似物有拉米夫定（LAM）、阿德福韋酯（ADV）、恩替卡韋（ETV）、替比夫定（LdT）、替諾福韋酯（TDF）和富馬酸丙酚替諾福韋（TAF）等。與拉米夫定常見(jiàn)耐藥相關(guān)的突變?yōu)閞tM204I/V和rtLl80M，其中rtM204V多與rtLl80M聯(lián)合出現(xiàn)，rtM204I可單獨(dú)出現(xiàn)。與阿德福韋酯常見(jiàn)耐藥相關(guān)的突變?yōu)閞tN236T與rtAl8lV/T，兩個(gè)位點(diǎn)可單獨(dú)或聯(lián)合出現(xiàn)。與恩替卡韋常見(jiàn)耐藥相關(guān)的突變是在rtM204V+rtLl80M基礎(chǔ)上，再聯(lián)合rtTl84、rtS202或rtM250三個(gè)位點(diǎn)中至少一個(gè)位點(diǎn)的氨基酸替代突變。與替比夫定常見(jiàn)耐藥相關(guān)的突變?yōu)閞tM204I，其他位點(diǎn)如rtAl8lV/T等尚存在爭(zhēng)議。替諾福韋酯和富馬酸丙酚替諾福韋目前尚未發(fā)現(xiàn)確認(rèn)的耐藥突變。

HBV耐藥相關(guān)的檢測(cè)主要包括基因型耐藥檢測(cè)和體外表型分析等。

HBV基因型耐藥檢測(cè)是指采用分子生物學(xué)方法檢測(cè)已在體外表型分析中被證實(shí)與抗病毒藥物耐藥相關(guān)的HBV突變的臨床檢測(cè)。常用方法包括：PCR-測(cè)序法（direct PCR sequencing）、基因芯片法（gene chip）、PCR-反向雜交法（PCR-reverse hybridization assay）、實(shí)時(shí)熒光PCR法（real-time PCR）等。

HBV體外表型分析（in vitro phenotypic analysis）：是公認(rèn)的確認(rèn)耐藥的檢測(cè)方法，通過(guò)體外復(fù)制系統(tǒng)證實(shí)檢測(cè)到的HBV突變會(huì)降低其對(duì)抗病毒藥物的敏感性，常用半數(shù)有效濃度（50% effective concentration，EC50）或半數(shù)抑制濃度（50% inhibitory concentration，IC50）來(lái)評(píng)價(jià)耐藥程度的高低。其方法是將含有待檢測(cè)耐藥突變位點(diǎn)的HBV全基因組導(dǎo)入肝細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞系，再將不同濃度梯度的核苷（酸）類(lèi)似物加入細(xì)胞培養(yǎng)液中，經(jīng)過(guò)一定培養(yǎng)時(shí)間后檢測(cè)藥物作用下HBV DNA的復(fù)制情況，計(jì)算EC50，通過(guò)與野生株病毒的EC50比較，判斷該突變對(duì)核苷（酸）類(lèi)似物的敏感性。當(dāng)抑制病毒復(fù)制所需的EC50與野生株相比增加l00倍以上稱(chēng)為高度耐藥、l0 ～ 99倍為中度耐藥、2 ～ 9倍為輕度耐藥。

本指導(dǎo)原則所指乙型肝炎病毒耐藥相關(guān)基因突變檢測(cè)試劑是指利用PCR-測(cè)序法、基因芯片法、PCR-反向雜交法和實(shí)時(shí)熒光PCR法等技術(shù)，對(duì)人體血清/血漿樣本中乙型肝炎病毒耐藥基因突變位點(diǎn)進(jìn)行定性檢測(cè)的試劑。臨床適用人群為核苷（酸）類(lèi)似物治療過(guò)程中出現(xiàn)病毒學(xué)突破的患者。除非有明確證據(jù)表明初治患者感染HBV來(lái)自接受核苷（酸）類(lèi)似物抗病毒治療患者，一般不主張對(duì)初治患者進(jìn)行基因型耐藥檢測(cè)。

本指導(dǎo)原則是基于實(shí)時(shí)熒光PCR方法對(duì)產(chǎn)品相關(guān)申報(bào)資料提出要求，其他方法學(xué)的產(chǎn)品可依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中具體內(nèi)容是否適用，如不適用，可另行選擇符合自身方法學(xué)特性的技術(shù)要求或評(píng)價(jià)方法。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）（以下簡(jiǎn)稱(chēng)《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。