連花清瘟膠囊/顆粒是應(yīng)用中醫(yī)絡(luò)病理論指導(dǎo)研制的治療病毒類呼吸系統(tǒng)傳染病的創(chuàng)新中藥,具有“清瘟解毒,宣肺泄熱”功能。藥效學(xué)研究顯示連花清瘟具有廣譜抗病毒,抑菌抗炎,退熱止咳化痰,調(diào)節(jié)免疫,提高機體抗病康復(fù)能力等作用,現(xiàn)已成為應(yīng)對多種呼吸系統(tǒng)傳染病的代表性中成藥。

連花清瘟具有廣譜抗病毒作用

由廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸系統(tǒng)疾病國家重點實驗室研究表明連花清瘟可多環(huán)節(jié)抗甲型流感病毒H3N2,具有綜合抑制、預(yù)防病毒吸附、抑制病毒吸附后復(fù)制增殖以及直接殺傷病毒作用。莫紅纓等采用治療給藥和預(yù)防給藥的不同方式測定連花清瘟對甲型H3N2病毒的體外抑制及其時效關(guān)系,均表現(xiàn)出較好的抑制甲型H3N2病毒的作用,且預(yù)防用藥抑制病毒增殖作用效果最顯著。

軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所采用預(yù)處理、共處理、后處理三種不同給藥方式,證實連花清瘟能延長H1N1病毒感染小鼠平均存活時間,減小感染小鼠肺指數(shù),減輕肺組織炎癥病變。另有研究發(fā)現(xiàn)連花清瘟膠囊對H7N9在內(nèi)的一系列流感病毒具有廣譜抑制作用,調(diào)節(jié)病毒感染免疫反應(yīng)。樊高薇等研究顯示連花清瘟能改善甲型H1N1流感病毒性肺炎小鼠咳嗽、呼吸困難等癥狀,肺組織炎癥細胞浸潤明顯減少,水腫及充血現(xiàn)象得到緩解,增強小鼠免疫功能,降低炎性反應(yīng)水平,保護小鼠肺組織的作用。

此外,研究證實連花清瘟明顯抑制流感病毒FM1、副流感病毒,有效抑制呼吸道合胞病毒(RSV)、腸道病毒71(EV71)、柯薩奇病毒。莫紅纓等證實連花清瘟通過調(diào)節(jié)炎性細胞因子表達以減輕FM1流感病毒引起的小鼠肺部炎癥損傷。丁月文等研究顯示連花清瘟可降低感染呼吸道合胞病毒(RSV)病毒BALB/c小鼠肺部病毒滴度及炎癥細胞因子水平;通過體外細胞研究發(fā)現(xiàn)連花清瘟能抑制不同株流感病毒如H1N1、H3N2、H6N2、H9N2、H7N9體外增殖,抑制病毒核衣殼蛋白在感染細胞中的核輸出;早期干預(yù)(0～2h)可阻斷病毒感染,抑制病毒誘導(dǎo)的NF-kB(核因子激活的B細胞的κ-輕鏈增強)激活,并以劑量依賴方式減輕病毒誘導(dǎo)的IL-6、IL-8、TNF-a、干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)因表達,證實連花清瘟具有廣譜抗甲型流感病毒作用。

廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸系統(tǒng)疾病國家重點實驗室最新研究證實,連花清瘟對新冠病毒(SARS-CoV-2)誘導(dǎo)的細胞病變半數(shù)抑制濃度(IC50)為411.2μg/mL,在給藥濃度為150、300、600μg/mL時,顯著抑制SARS-CoV-2病毒表達量,具有劑量依賴性,且抑制病毒感染細胞空斑形成,證實連花清瘟體外明顯抑制SARS-CoV-2病毒活性;連花清瘟干預(yù)感染病毒48小時的非洲綠猴腎細胞(Vero-E6),結(jié)果顯示其抑制細胞內(nèi)病毒表達量,改變細胞內(nèi)病毒形態(tài),證實連花清瘟可以抑制細胞內(nèi)病毒復(fù)制。

此外,中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗動物研究所研究證實,感染新冠病毒模型組小鼠感染后出現(xiàn)體重下降,平均下降百分比最高為5.75%。與模型組比較,連花清瘟組小鼠感染后第3天和第5天體重可明顯抑制動物體重下降(P<0.01);而且與模型組相比,連花清瘟組肺組織炎癥病變有一定程度改善,提示連花清瘟對新冠模型小鼠肺部炎性損傷和臨床癥狀有一定改善作用。

連花清瘟具有抑菌作用

連花清瘟能有效抑制金黃色葡萄球菌、流感桿菌、肺炎球菌等,抑制金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌甲氧西林耐藥菌株細菌生物膜形成。

由廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸系統(tǒng)疾病國家重點實驗室研究表明,連花清瘟能夠抑制甲型流感病毒(A/PR/8/34)繼發(fā)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的重癥肺炎,能夠抑制病毒疊加細菌感染導(dǎo)致的肺上皮細胞黏附因子的表達,抑制各種促炎因子(IL-6、IL-8、TNF-α)的表達,降低炎癥細胞的浸潤。

廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸系統(tǒng)疾病國家重點實驗室進一步研究發(fā)現(xiàn),非致死劑量的金黃色葡萄球菌(S.aureus)在非致死劑量流感病毒(H1N1)之后的重復(fù)感染在小鼠中同樣致命,這證實了繼發(fā)感染的嚴重程度。同時證實了連花清瘟對H1N1繼發(fā)性金黃色葡萄球菌感染所致肺損傷的緩解作用,結(jié)果提示連花清瘟可能對流感繼發(fā)性細菌感染疾病有較好的治療作用。

連花清瘟具有抗炎作用

連花清瘟能夠抑制由各種致病因素引起的肺部感染和炎癥反應(yīng)。連花清瘟可有效抑制FM1病毒感染小鼠多種組織細胞炎性因子,如:TNF-α、IL-1β、白細胞介素-4(IL-4)、IL-6、白細胞介素-12(IL-12)、白細胞介素-13(IL-13)等表達。崔雯雯等研究發(fā)現(xiàn)連花清瘟通過抑制IKK/IκB/NF-κB信號通路,抑制炎性細胞浸潤,改善肺泡上皮細胞和肺血管內(nèi)皮細胞連接蛋白的表達,緩解肺組織損傷?？梢种贫妆街滦∈蠖[脹,抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹,降低醋酸所致小鼠腹腔毛細血管通透性。

許寧等研究證實連花清瘟降低PM2.5急性暴露大鼠肺泡灌洗液和血清IL-1、IL-6、TNF-α水平,對PM2.5懸液急性暴露所致肺部炎性損傷具有拮抗作用。汽車尾氣暴露所致小鼠肺損傷研究顯示,連花清瘟通過降低肺組織炎性因子IL-6、IL-1β、IL-4、IL-12、IL-13、TNF-α表達,抑制中性粒細胞在氣道和肺組織中的聚集,改善肺組織的病理損傷。李琦等通過體外實驗和體內(nèi)實驗證實了連花清瘟能夠通過降低MCP-1表達量和單核巨噬細胞在肺部感染灶的趨化和募集,進而降低了病理性炎癥損傷水平,阻斷了急性肺損傷(ALI)模型動物的疾病進展。

雷章等研究證實連花清瘟0.42g/kg可降低MCP-1在大鼠放射性肺損傷組織與血清含量,抑制巨噬細胞向損傷肺組織中聚集,抑制急性放射性肺損傷大鼠肺組織與血清中主要炎癥因子IL-6與TNF-α的釋放,從而減輕急性放射性肺損傷的炎癥反應(yīng),緩解了大鼠急性放射性肺損傷的癥狀。

許寧等證實連花清瘟2、4、8g/kg劑量可降低PM2.5急性暴露致肺部炎性損傷大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)及血清中TNF-α、IL-1、IL-6水平及血清中TNF-α,對肺部炎性損傷具有拮抗作用。

韓書芝等則證實連花清瘟2、4、8g/kg劑量對PM2.5急性暴露致肺損傷大鼠血清IL-17及肺表面活性蛋白A(SP-A)水平均有不同程度降低,同樣證實連花清瘟對肺部損傷有保護作用。

夏敬文等以香煙熏吸法復(fù)制慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型,結(jié)果LHQW治療組血清、肺組織及支氣管肺泡灌洗液中IL-8和TNF-α含量顯著降低。

陳之力研究發(fā)現(xiàn)連花清瘟對急性肺栓塞(APE)家兔治療后1、2、4和8h使平均肺動脈壓(MPAP)、肌鈣蛋白(cTnI)、NT-N端前腦鈉肽(NT-proBNP)、TNF-α、IL-6和IL-1β顯著降低、平均動脈壓(MAP)顯著升高,肺栓塞組織中性粒細胞積累顯著減少。連花清瘟有助于降低APE家兔的機體炎癥水平,改善動脈血氣和血流動力學(xué)指標,并減輕心肌損傷。

武漢大學(xué)人民醫(yī)院呼吸與危重病醫(yī)學(xué)科證實,連花清瘟通過抑制p53介導(dǎo)的肺泡上皮細胞凋亡來降低脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷(ALI)。許萍等研究表明,連花清瘟膠囊通過恢復(fù)病毒性肺炎小鼠腸內(nèi)微生物群α多樣性和短鏈脂肪酸產(chǎn)生菌水平,改善腸粘膜屏障損傷,減少腸壁免疫反應(yīng),從而減少進入肺部的細菌代謝產(chǎn)物(LPS),激活LPS/TLR4/NF-kB和LPS/TLR4/凋亡途徑,從而減少炎癥細胞因子的過度分泌,促進肺部病毒的清除。

連花清瘟具有退熱止咳化痰作用

張慶宏等采用大腸桿菌內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱模型,測定給藥后不同時間的體溫變化。結(jié)果連花清瘟能抑制家兔耳緣靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素后引起的體溫升高,降溫作用可持續(xù)6小時以上。同時連花清瘟藥效研究結(jié)果顯示,其對三聯(lián)菌苗(傷寒、甲型副傷寒和乙型副傷寒)耳緣靜脈注射引起的家兔發(fā)熱有解熱作用,降溫作用可持續(xù)約5小時,可延長小鼠氨水引咳的咳嗽潛伏期,減少咳嗽次數(shù),也可減少豚鼠枸櫞酸引咳的咳嗽次數(shù),還可增加小鼠氣管段酚紅排泌量,從而稀釋痰液,便于排出。

連花清瘟具有調(diào)節(jié)免疫作用

研究顯示,連花清瘟可增強氫化可的松致免疫功能低下模型小鼠的遲發(fā)性超敏反應(yīng),提高環(huán)磷酰胺致免疫功能低下模型小鼠的腹腔巨噬細胞吞噬功能和血清溶血素抗體水平。同時對機體感染病毒具有免疫調(diào)節(jié)作用,增加FM1感染后CD4+和CD4+/CD8+T細胞表達水平,提高小鼠流感病毒后肺組織中γ-IFN水平。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究探討其組方成分與其藥效作用的相關(guān)性,證實連花清瘟主要通過提高人體免疫力及抑制FcεRI,ErbB, MAPK等炎癥通路治療新冠肺炎。

連花清瘟藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

廈門大學(xué)吳彩勝教授聯(lián)合海軍軍醫(yī)大學(xué)柴逸峰教授團隊在連花清瘟防治新冠肺炎藥理活性成分研究方面取得新進展,基于高分辨質(zhì)譜(HRMS)和智能非靶向數(shù)據(jù)挖掘以及全新的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)生物色譜技術(shù),成功鑒定體內(nèi)連花清瘟85個相關(guān)成分,其中苦杏仁苷、野黑櫻苷、甘草酸、連翹苷A、連翹苷I、大黃酸、蘆薈大黃素等都與ACE2有親和力,通過墨蝶呤還原酶(SPR)、ACE2活性抑制和分子對接實驗進一步進行活性評價,發(fā)現(xiàn)大黃酸,連翹酯苷A,連翹酯苷I,新綠原酸及其異構(gòu)體均對ACE2具有較高的抑制作用。這些化合物可通過阻斷新冠病毒S蛋白與ACE2結(jié)合以及結(jié)合在新冠病毒S蛋白-ACE2復(fù)合體表面抑制SARS-CoV-2,協(xié)同發(fā)揮治療作用。

長春大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)藥理教研室研究表明,連花清瘟通過AGE-RAGE通路調(diào)節(jié)IL-6的表達,能夠明顯抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。進一步針對連花清瘟中的主要活性成分槲皮素、木犀草素、黃芩素進行藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn),這些成分能夠穩(wěn)定結(jié)合在IL-6受體的β亞基,具有阻斷SARS-Cov-2的冠狀病毒S蛋白(Spike蛋白)激活I(lǐng)L-6受體潛在作用,提示連花清瘟調(diào)節(jié)免疫抗新冠病毒的作用可能是通過活性成分抑制病毒激活的IL6R/IL6/IL6ST通路相關(guān)。

進一步通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)揭示連花清瘟治療新型冠狀病毒肺炎的作用靶點及信號通路,結(jié)果顯示連花清瘟中連翹主要成分金絲桃苷、蘆丁和連珠苷E是SARS-CoV-2病毒主要蛋白酶最可能的抑制劑,構(gòu)建活性成分-基因靶點-通路網(wǎng)絡(luò),證實連花清瘟主要通過提高人體免疫力及抑制FcεRI、ErbB、MAPK等炎癥通路治療新冠肺炎。

連花清瘟作為應(yīng)用中醫(yī)絡(luò)病理論指導(dǎo)研發(fā)的治療病毒類呼吸系統(tǒng)疾病的品牌中成藥,自上市以來先后20余次列入呼吸系統(tǒng)傳染病防控權(quán)威指南或共識,成為應(yīng)對病毒引起的呼吸系統(tǒng)公共衛(wèi)生事件代表性中成藥。連花清瘟正在護衛(wèi)人民呼吸健康的斗爭中發(fā)揮著越來越重要的作用。